血清的化凍、滅活與分裝

1、化凍將血清（FetalBovineSerum，Hyclone）從－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜；也可室溫（或浸于自來水中）化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時(shí)保存；2、滅活①放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱（同時(shí)放入一個(gè)內(nèi)裝200ml自來水的血清瓶，插入一根溫度計(jì)，溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn)）；②當(dāng)溫度計(jì)顯示56℃時(shí)，控制在此溫度30分鐘±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56℃，則：若仍未超過60℃，且時(shí)間很短（比如：不超過5分鐘），則仍可使用；若超過60℃...

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細(xì)胞株凍存條件及方法

1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細(xì)胞株無血清培養(yǎng)基2、凍存方法：①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細(xì)胞不適應(yīng)此種方法）3、復(fù)蘇方法：①打開水浴，將培養(yǎng)基放入水浴中，待其穩(wěn)定至37℃；②細(xì)胞從液氮內(nèi)取出后，應(yīng)快速將細(xì)胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水浴）；③將溶化后將細(xì)胞凍存懸液離心，轉(zhuǎn)速1000rpm，3min,后棄去上清，使細(xì)胞重...

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細(xì)胞培養(yǎng)室的環(huán)境要求

細(xì)胞生長要求嚴(yán)格的無毒無污染環(huán)境，因此必須注意培養(yǎng)室的清潔衛(wèi)生，保持操作空間的無菌條件。1、培養(yǎng)室應(yīng)為獨(dú)立、封閉的空間。培養(yǎng)室及緩沖間都應(yīng)保持整潔，不要隨意出入；2、保持超凈工作臺(tái)的無菌環(huán)境，每次使用前打開紫外燈照射消毒15—30分鐘；每次使用后將廢棄物清理干凈，各用具規(guī)放整齊，用70%酒精擦凈臺(tái)面，再打開紫外燈照射30分鐘以上；3、定期擦洗桌面、地板、清潔培養(yǎng)室，并用0.1%的新潔爾滅溶液消毒；定期打開培養(yǎng)室的大紫外燈，將整個(gè)房間進(jìn)行照射消毒；4、每次打開培養(yǎng)箱前，或手伸入...

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主流產(chǎn)品的表面處理方式

一、康寧Corning1、標(biāo)準(zhǔn)TC處理：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿為大氣下等離子體處理，滾瓶和培養(yǎng)管為真空等離子體處理，處理的表面帶負(fù)電，增加氧原子含量。2、CellBIND處理：是指微波等離子處理，處理效果更好，更親水。二、BD1、BDFalcon處理：為真空等離子處理。2、BDPrimaria處理：為真空等離子體加入氧氣和氨氣混合氣體處理，使表面有含氧和含氮基團(tuán)。三、Nunc：表面處理專家1、PolySorp：對(duì)疏水性分子具有高親和力。2、MediSorp：化學(xué)性介于Poly...

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細(xì)胞系與細(xì)胞株的概念

一、細(xì)胞系（CellLine）原代培養(yǎng)舞經(jīng)傳代成功即成細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系（LineageofCells）所組成。二、細(xì)胞株（CellStrain）通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細(xì)胞株（finitecellstrain）;如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuouscellstrain）。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在...

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干細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1、擴(kuò)增：不同的干細(xì)胞，其擴(kuò)增方法不同。如造血干細(xì)胞為懸浮培養(yǎng)，而腫瘤干細(xì)胞則為貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞。2、消化：根據(jù)細(xì)胞耐受性的不同，有多種方法，如機(jī)械法，化學(xué)法，以及膠原酶、胰酶消化等不同方法。3、凍存：取處于對(duì)數(shù)期的干細(xì)胞,消化,并吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液,用2X培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，將等體積DMSO逐滴加入細(xì)胞懸液中，輕輕吹打混勻，重懸細(xì)胞于凍存管中，并置于凍存盒中，凍存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鑒定干細(xì)胞的一項(xiàng)重要指標(biāo)就是它的分化能力。一般分化采取加入細(xì)胞因子誘導(dǎo)、共培養(yǎng)、小分子刺...

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細(xì)胞培養(yǎng)用耗材污染與防治

一、培養(yǎng)用液1、未滅菌的試劑：高壓或過濾除菌。2、物品儲(chǔ)放區(qū)不潔：經(jīng)常清潔并作滅菌處理。3、消毒過程不標(biāo)準(zhǔn)：檢查高壓滅菌器是否工作正常；過濾后檢查濾膜是否破裂；滅菌后的液體仍需做無菌試驗(yàn)。4、一次性無菌用品不合格：進(jìn)行質(zhì)量檢測或更換供應(yīng)商。二、取材1、原代組織來源有污染，不要把動(dòng)物帶入培養(yǎng)室處理；2、可能有污染的組織應(yīng)在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、儲(chǔ)存時(shí)灰塵或細(xì)菌孢子進(jìn)入－一消毒后的器皿應(yīng)嚴(yán)密包裹，置于無菌物品放置區(qū)；未包裹物品放...

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細(xì)胞的兩種運(yùn)輸方法

一、凍存運(yùn)輸使用干冰置于塑料泡沫盒中，處理得當(dāng)，可以保存3天。一旦出現(xiàn)融解，細(xì)胞活力將急劇下降。將細(xì)胞凍存管嚴(yán)密包裹，所用塑料泡沫盒應(yīng)該不小于300×300×300mm，壁的厚度約為50mm，內(nèi)部空間為200×200×200mm，這樣大的空間需放入5kg干冰。以zui快的速度將細(xì)胞從液氮轉(zhuǎn)入干冰中，否則細(xì)胞將以10～20℃／min的速度升溫。不能讓溫度高于－50℃。到達(dá)目的地后，即可按常規(guī)復(fù)蘇處理。二、活細(xì)胞運(yùn)輸細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長期早期或中期，狀態(tài)良好。如果細(xì)胞密度過大，培...

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