細(xì)胞凍存和復(fù)蘇原則及程序

一、凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍快融

    當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。

二、標(biāo)準(zhǔn)程序

    當(dāng)溫度在-25℃以上時，1～2℃/min當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，5～10℃/min，當(dāng)溫度達(dá)-100℃時，可迅速放入液氮中

三、簡易程序

    將凍存管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以線繩，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1～2℃的速度，在40分鐘內(nèi)降至液氮表面，停30分鐘后，直接投人液氮中。

四、更簡單的

    也可以在凍存細(xì)胞時用厚厚的棉花把凍存管包起來，直接放進(jìn)－70度冰箱，復(fù)蘇效果也不錯。

   在細(xì)胞凍存時加入溫保護(hù)劑，能大大提高凍存效果。常用的低溫保護(hù)劑是DMSO，它是一種滲透性保護(hù)劑，可迅速透入細(xì)胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結(jié)過程，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。



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